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多肽偶联: KLH,BSA和 OVA

作者:科肽生物发表时间:2022-12-05浏览量:1840

定制抗体的产生可以通过使用两种主要方法之一来完成: 全长蛋白质和短肽,但合成肽抗原通常太小而不能自己产生显着的免疫应答。为了克服瓶颈,合成肽与更大的载体蛋白偶联,其含有许多表位有助于刺激 T 细胞并诱导 B 细胞应答。一些最常见的载体蛋白包括: 

KLH钥匙孔帽状血蓝蛋白:

KLH 是一种大的聚集蛋白,其分子量范围为4 * 105-1 * 107Da。KLH 的一个优点是它不会干扰 ELISA 或西方墨点法实验,因为它不会被用作封闭试剂。此外,与牛血清白蛋白相比,KLH 具有较高的免疫原性。如图1所示,PEG 和 PCB 与5种不同的蛋白质结合: 鼠血清白蛋白(MSA) ,BSA,KLH,β-葡萄糖苷酶或 OVA,KLH 在哺乳动物宿主中显示出极高的免疫原性。由于其大小和结构,在 KLH 水中的溶解度是有限的,使溶液和混合物呈现混浊的外观。然而,这并不影响免疫原性,混浊的溶液可用于免疫接种。 


多肽偶联 KLH&BSA& OVA.png

图一。四周 SC 后蛋白质特异性 IgM (a)和 IgG (b)滴度。通过 ELISA 测试,测量了皮下注射的 c57BL/6J 小鼠的 MSA、 BSA、 OVA、 β-葡萄糖苷酶和 KLH。C)用于结合的蛋白质和聚合物的说明性方案(Li,Bowen,et al。)


BSA牛血清白蛋白(牛血清白蛋白)

牛血清白蛋白(BSA)是一种来源于牛的血浆蛋白,分子量为7 × 104Da。因为 BSA 比 KLH 小,所以它比 KLH 更易溶于水。然而,牛血清白蛋白的缺点是在许多实验中被用作阻断缓冲试剂。如果在基于抗体的检测中使用针对肽 -BSA 偶联物的抗血清,假阳性是常见的,因为所使用的血清也含有针对 BSA 的抗体。


OVA (Ovalbumin)卵清蛋白

卵清蛋白(OVA)是蛋清中含量最丰富的蛋白质,其分子量为4.5 × 104Da。它经常被用作第二载体蛋白,以确认抗体是特异性的肽,而不是载体蛋白,如牛血清白蛋白。

上述载体蛋白可以与 N 端、 C 端或内部残基上的肽缀合。我们建议将载体蛋白结合到肽的 N 端或 C 端,以便向宿主免疫系统提供尽可能多的氨基酸测序。一种常见的接合方法是马来酰亚胺法,它将肽的半胱氨酸残基与载体蛋白偶联。对于没有半胱氨酸残基的肽,将一个半胱氨酸残基添加到肽的 N- 或 C- 末端,以便它可以连接到载体蛋白。作为一般指南,如果肽来源于蛋白质的 N 端,那么与载体蛋白偶联应该在 C 端,相反,载体蛋白被添加到肽的 N 端。如果肽来自蛋白质的内部,则载体蛋白与肽的 N- 或 C- 末端结合。 


这里是一个总结,KLH 是首选的免疫原在许多情况下的免疫。当考虑成本时,通常选择 BSA 或 OVA。牛血清白蛋白具有高度的非特异性结合,是免疫分析捕获抗原的理想选择,而 OVA 已被用于免疫原和捕获抗原。


此外,为了产生免疫应答或高质量的多克隆抗体,关键步骤之一是设计最佳的合成肽抗原。尝试优化抗原设计工具,选择最好的抗原。如果您有关于肽结合或合成肽抗原的问题,请与我们联系:

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