多肽合成方法－N-羧基内酸酐法
Hermann Leuchs在1906看发现，在N－羧基内酸酐（NCA）中，氨基酸的羧基活化和酰基保护同时发生。因此，在德国文献中，又称之为Leuchs－酸酐。原则上，该类衍生物应具备理想的前提条件以应用于多肽合成。
第一个N－羧基内酸酐（1，3－氧氮杂环戊烷－2,5－二酮）是从N－（乙氧羰基）氨基酸酰氯消除氯乙烷而得到的。制备该类衍生物的一个好方法是游离氨基酸与光气反应，相应的氨基甲酰氨为中间体。然而，痕量的水就能使N－羧基内酸酐发生聚合，因为最初形成的氨基甲酸自动脱去羧基得到游离胺，此游离胺是发生进一步开环反应的亲核试剂。因此，NCA方法在肽合成中的应用一直受到限制，直到1966年才探索出正确的反应条件，可以在水性介质中用N－羧基内酸进行有条件的肽合成。在低温和pH值为10.2的条件下，N－羧基内酸酐能迅速酰化氨基酸和肽。在pH值增加到10.2时，同时加入下一种N－羧基内酸酐，开始下一轮缩合。为减少中间体肽氨基甲酸酯和氨基组分间的羧酸酯的交换，必须剧烈搅拌反应混合物。精确控制pH值是另一个前提条件（氨基酸要求在pH值为10.2－10.5,肽要求在pH值为10.2）,因为当pH值大于10.5时，产生副产物乙内酰脲。
N－羧基内酸酐的硫类似物即N-硫代羧基内酸酐（N－thiocarboxy anhydrides,NTA）也可以用于肽合成，因为硫代氨基甲酸酯具有较高的稳定性。酰化反应可以在pH值低到9－9.5时进行，因而可以防止可能的水解转化为乙内酰脲。NCA/NTA方法尤其适用于不需要分离反应中间体的片段缩合。三官能团氨基酸（除赖氨酸和半胱氨酸）不需要侧链保护。采用该方法已组合了核糖核酸酶S－蛋白的几个片段，之后采用叠氮物法可得到完整的S－蛋白.
最近，NCA方法再一次引起极大的关注，归功于已制备出氨基甲酸酯保护的N－羧基内酸酐（urethane-protected N-carboxy anhydrides,UNCA）,并用于肽合成。在非质子溶剂中和三级碱存在的条件下，利用合适的试剂，可以将NCA的环上氮原子酰化，引入Boc、 Z或 Fmoc基团，得到相应的UNCA68（Y＝Boc，Z， Fmoc）。从大多数氨基酸可获得UNCA晶体，并在无水条件下稳定存在。UNCA对亲核试剂表现出高反应活性，在常用于肽固相和液相合成的大多数无水溶剂（除醇以外）中，高速形成所需肽键。二氧化碳是唯一的副产物，并且没有发生寡聚或聚合的危险，因为在缩合反应后，增长中的肽链氨基端仍然被氨基甲酸乙酯保护着。
最近又报道了N－三苯甲基和N－苯基勿甲基保护的NCA。
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